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    實時熒光定量PCR的方法

    發布時間:2020-07-28   點擊次數:468次

    實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的方法有實時熒光PCR一步法與實時熒光PCR兩步法。一步法與兩步法有什么區別呢?一步法為反轉錄和PCR擴增在同一個管內完成。兩步法為反轉錄和PCR擴增分兩步進行,先從RAN模板反轉錄得到cDNA,得到的cDNA在進行一次或多次不同的PCR反應。一步法與兩步法有那些優點呢?一步法: 快速, 簡便, 敏感, 減少污染機會, 減少了RNA 二級結構, 聚合酶具有校正活性, 減少PCR 反應的錯配率。兩步法: 同一管中同時擴增兩個引物, 減少了一些人為的誤差; RNA 轉錄為cDNA, 易于保存,把反轉錄體系分開做,一次的轉錄產物可以多次用來做PCR,非常適用于摸索PCR條件。;兩步法整個過程比一步法的費用少。一步法和兩步法各有其特點,要按照試驗的對象具體確定用那一種方法,對不適合于提取mRNA的樣品只能用一步法RT-PCR方法。熒光PCR凍干設備技術要點:1.無外界干擾熱量。2.內部溫度均一。3.極限真空度好。4.設備過程控制能力強。試劑凍干機Pilot5-8T涉及產品有熒光PCR、免疫微球、化學發光、基因芯片、量子點、ELISA、膠體金、POCT、IVD校準品質控品校準品、內毒素檢測試劑、血清、白蛋白、干細胞及相應提取物等。

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