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    熒光PCR凍干-DTT

    發布時間:2020-07-27   點擊次數:434次

    二硫蘇糖醇(簡稱為DTT)是一種小分子有機還原劑,其還原狀態下為線性分子。DTT有什么特點?怎么保存呢?DTT是一種常用還原劑,有抗氧化作用,進口分裝。DTT和巰基乙醇相比, DTT的刺激性氣味要小很多,毒性也比巰基乙醇低很多。另外DTT比巰基乙醇的濃度低7倍時,兩者效果相近。DTT一般保存條件為-20℃保存。1M DTT溶液可以在-20℃保存2年以上。由于容易被空氣氧化, DTT的穩定性較差;但冷凍保存或在惰性氣體中處理能夠延長它的使用壽命。DTT作為PCR的添加劑與DMSO、甜菜堿、BSA混合配制成的復合型添加劑,按照一定比例配比,能獲得PCR擴增特異性和很高的PCR擴增產量。PCR的擴增反應并不是可以無窮地進行下去的,經過一定的循環周期后需擴增的片段不再按指數增多而逐漸進入平坡;進入平坡的循環次數,取決于起始時存在的模板拷貝數以及合成的DNA總量。所謂平坡就是批PCR循環的后期,合成產物達0.3~1pmol時,由于產物的堆積,使原來以指數增加的速率變成平坦的曲線。

    試劑凍干機Pilot3-6T應用示例(熒光PCR凍干):

    1. 探針、底物、引物原料要求確定。
    2. 凍干溶液配方開發,采用正交法或響應曲面法進行輔料篩選。
    3. 選擇適合的包材和模具。
    4. 設計凍干曲線配合輔料篩選。
    5. 確定配方及工藝。
    6. 穩定性測試。
    7. 根據穩定性測試結果修正工藝或配方。
    8. 整個環節注意環境、設備、人員的結合。

     

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